Phos-tag Tipを用いた核酸医薬品の新規不純物分析法の開発
概要
3KRVWDJ7LS Ν༽͏ͪ֫ҫ༂و९ੵ๑
ദ࢞ช
೧
߁ౣָָӅ ҫࣅ༂ฯָ݊ڂݜՌ
ദ࢞՟ఖ غޛ༂Ռָߊ
ҫ༂ࢢؽՌָ࣪ڂݜ
߄ থ
1
࣏
གྷ༁
ࣰߴݩ
݃Վͳߡࡱ
݃
ࢂߡชݛ
ึଏࣁྋ
2
1. གྷ༁
ʴഐܢʵ
֫ҫ༂ͺɼ͞ΗΉͲ࣑ྏ͗ೋ͖ͮͪ͢Ҫఽ࣮׳Ώೋ࣑࣮׳ͶଲͤΖ࣑ྏްՎ͗غ
ଶͲ͘Ζ͞ͳ͖ΔɼΠϱϟρφϟυΡΩϩωʖθͶ͓ͪ͞ΖϠξϨτΡͳ͢ͱΝॄΌͱ
͏Ζɽ֫ҫ༂ͺॊཔҫ༂͗ඬదͳͤΖνϱϏέ࣯ͳͺҡ͵Εɼͨླྀ '1$ ͍
Ζ͏ͺ 51$ ϪϗϩͲਫ਼ରΝ͘ͲޜΖ఼͗͘͵ಝͲ͍ΖɽຌͲڂݜͺɼ֫ҫ༂
Ͳ࠹ଡࣰ͚༽Կ͠Ηɼޫึଡ͏ ຌ࠱ '1$51$ ΝνʖΰρφͶࣰݩΝΌ
ͪɽ֫ҫ༂ͺҲൢద͵Կָҫ༂ͳർֳ͢ͱɼ९ིࠠ͗߶͏ܑͶ͍Εɼ
ࡑݳੵٗढ़Ͳͺɼ֦ྪԓ࣯ΝݺพͶ؇ཀྵͤΖ͞ͳͺࠖೋͲ͍Ζίʖη͗ଡ͏ɽ֫ҫ
༂९ੵ๑ͺ༹ʓ͵झྪ๏๑͗͠ڂݜΗͱ͏Ζ͗ɼ/&89 ͚͢ͺ /&06 Ν
༽͏ͪࢾݩ๏๑͗ҲൢదͲ͍ΖɽΨϨβϊέϪΨοχͺෝు՛Νଵ;ͱ͕Εɼٱ૮ͲܧͺΩ
ϧϞͶฯ࣍͠Η͵͏ͪΌɼφϨΦοϩΠϝϱʤ7($ʥ͵ʹΨϱϘΠࢾ༂ΝҢಊ૮ͶశՅ
ͤΖ ,3+3/& ๑͗Γ͚༽͏ΔΗͱ͏Ζɽ͞ΗΉͲࢾݩ๏๑ͺɼϨϱخΝ࣍ͯ९
ͶϓΧʖΩη͢ͱ͕ΔͥɼͶϨϱͳ͚ͯ͗خΨϱԿްི͗Ծ͗Ζ͞ͳ͗ఈ͠Η
ΖɽͨͪΌɼϟϱϒʖέͶ༻ड़Ғ͗ۛ͏ͺɼ06 ͲੵͲݗड़͗ೋ͢͏ͳߡ͓
ΔΗΖɽ͞ഐܢΝΉ͓ͱɼΨϨβϊέϪΨοχࡋ͵ੵͪΌͶͺɼझʓνϕ
९Νࢾྋ༻ӹ͖ΔϨϱԿΨϨβϊέϪΨοχΝՆͶͤΖεϱϕ
ϩͲใׇద͵๏๑͗චགྷͲ͍Ζͳߡ͓ͪɽ
خຌߑଆ
/1$
b20H
֫ҫ༂خຌߑଆ
3KRVWDJDJDURVH Ν༽͏ͪ 3KRVWDJ7LS
3
ජं͗ॶͤΖͲ࣪ڂݜͺɼΠϩΩϨϓΧηϓΟνʖκৼͲ͍Ζ್֫ѧԘࡪରΝϠ
υϩԿͪ͢ఁࢢ͗ϨϱϠόΦητϩΨϱʤ5232ʥΝ༑దͶำଌͤΖ͞ͳΝ
͢ݡɼ͞ѧԘ߮ોϠυϩԿఁࢢΝخͶ್֫ѧԘࡪରͲ͍Ζ 3KRVWDJELV
>ELVS\ULGLQ\OPHWK\ODPLQR@SURSDQRODWRGL]LQF,,͗͠Ηͪɽ͞ 3KRVWDJ ͺɼ
ਫ਼ཀྵড়݇ԾͶ͕͏ͱɼ್ͯѧԘΨϱͳϨϱخ್ͯોΠωΨϱͺ͵ݽکഓҒ݃
ΝܙͤΖͪΌɼϨϱϠόΦητϩΝಝҡదͶำଌͤΖ͞ͳ͗Ͳ͘Ζɽ=Q3KRVWDJ ͺɼ
ϨϱζΠωΨϱΝΩϩϚϱΠωΨϱΓΕ༁ ഔ͚کำଌͤΖߡ͓ΔΗͱ͕Εɼ
ਫ਼ର߶ࢢͲ͍ΖϨϱԿνϱϏέ࣯Ͷଲ͢ͱɼ3KRVWDJ ͺϨϱԿΠϝόخझ
ྪͶ͖͖ΚΔͥɼำଌͤΖ͞ͳ͗Ͳ͘ΖɽຌͲڂݜͺɼ3KRVWDJDJDURVH Ν ¡/ Ϝέ
ϫϒϘρφορϕͶͯΌͪ 3KRVWDJ7LS Ν༽͏ͱɼඉϨϱԿΨϨβϊέϪΨοχ͖Δ
ϨϱԿΨϨβϊέϪΨοχΝમదͶͶͲ͘͵͏͖ݗ౾Νߨͮͪɽ3KRVWDJ7LS
಼Ϩϱ݃෨Ғྖͺ༁ QPRO Ͳ͍Εɼ,353/&06 ੵ༽ࢾྋ͗ՆͲ͍
ΖɽຌͲڂݜͺɼళષΨϨβϊέϪΨοχ;ٶԿָर২ΨϨβϊέϪΨοχΝϠυϩࢾ
ྋΝ༽͏ͱ֫ҫ༂९ੵͪΌ 3KRVWDJ7LS ๑ড়݇ݗ౾;ٶɼ
ͨ༽๏๑Ͷͯ͏ͱݗ౾ͪ͢ɽ
ʴ݃Վͳߡࡱʵ
ড়݇ݗ౾
ళષܗΨϨβϊέϪΨοχ6ʤԚخʥͳb͗ϨϱԿ͠Ηͪ1t९6ʤԚ
خʥΝϠϩྖࢾྋ༻ӹΝ༽͏ͱɼ3KRVWDJ7LS๑Ͷ͕͜ΖϙηϙϠόΦητϩܗ९
༑ద͵݃Ͷ࠹న͵؉ুӹݗ౾ΝߨͮͪɽϨϱԿΨϨβϊέϪΨοχ९ް
ིద͵ੵͪΌɼඉΨϨβϊέϪ
Ψοχͺો௪ΕժɼඉϨϱԿ
ΨϨβϊέϪΨοχͺજժɼ
ϨϱԿΨϨβϊέϪΨοχͺ༻ड़
ժժͲ͘Ζ๏๑͗࠹నͲ͍Ζ
3KRVWDJ Ͷ݃ͪ͢જఖϕφϪεϱ
ͳߡ͓ͪɽ࠹న͵؉ুӹΝݗ౾ͪ͢
݃ΨϨβϊέϪΨοχਬఈߑଆ
4
݃ՎɼҐԾ؉ুӹΝમఈͪ͢ɽࢾྋ༻ӹͳ͢ͱɼP0%LV7ULV&+&22+ʤS+ʥ
ͳP0ϕφϪεϱɼજӹͳ͢ͱ0%LV7ULV&+&22+ɼP0&+&221D;ٶ
P00J&OʤS+ʥɼ༻ड़ӹͳ͢ͱ01D32;ٶ0&+&22+ʤS+ʥɽ
͞ϕϫφαʖϩͲͺɼ:ժͶଲͤΖΨϨβϊέϪΨοχྖͶർ΄ͱ:;ٶ:ժ
ྖ༙ͺͺΖ͖Ͷঙ͵͚ɼ෨͗:ժͶ༻ड़͠Ηͱ͏ͪɽนͶɼ3KRVWDJͶ݃͢
ͪજఖϕφϪεϱ݃ΨϨβϊέϪΨοχਬఈߑଆΝࣖͤɽ3KRVWDJ7LSΝ༽͏
ͪϕϫφαʖϩͺɼਫ਼ཀྵড়݇Ծɼ࣪ԻͲࢾྋͪΕາຮͲ͍Εɼ3KRVWDJ݃ΨϨ
βϊέϪΨοχ6;ٶ6ͺ࣪ԻͲ݃;ٶજஊؔͶ࣎ؔ๎ͪ͢Ͳޛɼ݃Վ
ͳ͢ͱϏνʖϱͺΆͳΞʹรԿ͗͵͚ɼ3KRVWDJ݃ΨϨβϊέϪΨοχͺͨؔغ
҈ఈͲ͍Ζ͞ͳΝࣖͪ͢ɽຌ๏๑ͶΓΕɼ෨ඉΨϨβϊέϪΨοχͺ)7ժɼ
ඉϨϱԿΨϨβϊέϪΨοχͺ:ժɼϨϱԿΨϨβϊέϪΨοχͺ༻ड़ժͨΗ
ͩΗյफͤΖ͞ͳ͗Ͳ͘ΖͳΚ͖ͮͪɽΉͪɼ͞ώρϓΟʖܧͺ֦)7༻ӹɼજ༻ӹ;ٶ
༻ड़༻ӹͺͨΉΉ/&06ੵͶ࢘༽ͤΖ͞ͳ͗Ͳ͘ΖͪΌɼ൜༽͗߶͏๏๑Ͳ͍Ζͳߡ
͓ΔΗΖɽ
झʓγϱϕϩన༽ৄݗ
͞خຌϕϫφαʖϩ༹͗ʓ͵γϱϕϩͶన༽ՆͲ͍Ζ͖ΝͤৄݗΖͪΌͶɼԚخௗ͗
͖ΔΉͲझʓԚخഓγϱϕϩΝ༽͏ͱ3KRVWDJ7LSͶΓΖΝࢾΊͪɽࢾྋ
༻ӹͺϠϩྖϨϱخΝͪ͵͏ΨϨβϊέϪΨοχͳͨb͗ϨϱԿ͠
Ηͪ1t९Ν༽͏ͪɽͨ݃ՎɼΆͳΞʹͤ΄ͱΨϨβϊέϪΨοχͺ:ժͲյ
फིfͲঈ͠ڊΗɼbϨϱԿରͺ(ժͲյफིfͲ༑దͶյफ͠Ηͪɽ
͞3KRVWDJ7LS๑र২ΨϨβϊέϪΨοχనΝ֮ͤΖͪΌͶɼ/1$
ORFNHGQXFOHLFDFLG'༙1$ΨϨβϊέϪΨοχʤ6;ٶ6ʥͳ20H
2PHWK\ODWHGQXFOHLFDFLG༙51$'1$ΨϨβϊέϪΨοχʤ6;ٶ6ʥΝͨΗͩ
ΗQPROͥͯࢾྋ༻ӹͶశՅͪ͢झྪࢾྋΝ༽͏ͪɽ6;ٶ6ͺ͏ͥΗજժ
ͶյफིͲ;ٶঈ͠ڊΗɼ
ϨϱԿ1t९Ͳ͍Ζ6;ٶ6ͺɼͨΗͩ
Ηյफི༻Ͳ;ٶड़ժͶમదͶյफ͠ΗͪɽҐ݃ՎΓΕɼ3KRVWDJ7LS๑
5
ͺɼళષܗΨϨβϊέϪΨοχ;ٶर২ܗΨϨβϊέϪΨοχ͏ͥΗɼඉϨϱԿΨ
ϨβϊέϪΨοχͳ͖ࠠΔϨϱԿΨϨβϊέϪΨοχΝՆͲ͍Ζ͞ͳ
Ν֮ͪ͢ɽ
/&06 ͶΓΖఈ
֫ҫ༂ͶࣰࡏͶࠠͤΖ९ྖͳ͢ͱͺɼͨΗͩΗ਼ҐԾͲ͍ΖɽͨͪΌɼࣰ
ࡏγϱϕϩΝఈ͢ɼϨϱԿ९ΝΨϨβϊέϪΨοχͶశՅͪ͢γϱϕϩ
Ν༽͏ɼࣰݩΝߨͮͪɽͨ݃Վɼࢾྋ༻ӹͲͺ֮Ͳ͘͵͖ͮͪϜηηϘέφϩ͗ɼ
3KRVWDJ7LS ͶΓΕժͪ͢ ( ժͶ͕͏ͱɼϨϱԿ͠Ηͪ९Νݗड़ͤΖ͞ͳ͗Ͳ
ͪ͘ɽ( ժͲΊݗड़Ͳͪ͘ཀྵ༟ͳ͢ͱͺɼϨϱԿ९Ν ( ժͶժͤΖ͞ͳͲɼ
ϟϱϒʖέͶΓΖΨϱԿཊΝյඈͲ͘ɼඉϨϱԿରΓΕΨϱԿްི͗ఁ͏Ϩϱ
ԿରΝݗड़ͤΖ͞ͳ͗Ͳͪ͘ͳߡ͓ΔΗΖɽΉͪɼ)7 ժͶकͶݗड़͠ΗͪϜηηϘέφ
ϩͲ͍ΗͻɼඉΨϨβϊέϪΨοχɼ: ժͶकͶݗड़͠ΗͪϜηηϘέφϩͲ͍Ηͻɼ
ඉϨϱԿΨϨβϊέϪΨοχɼ( ժͶकͶݗड़͠ΗͪϜηηϘέφϩͲ͍ΗͻɼϨϱ
ԿΨϨβϊέϪΨοχͲ͍ΖՆ͗߶͏ͳߡ͓ΔΗΖͲɼຌघ๑ͺɼߑଆਬఈҲঁͳ
͢ͱ༙༽Ͳ͍Ζͳߡ͓ΔΗΖɽ
ࢾྋ༻ӹ༻;ٶड़ժ /&06 ఈ݃Վ
6
ʴ݃ʵ
֫ҫ༂و९ੵ๑ͳ͢ͱɼ3KRVWDJ7LSΝ༽͏ͱɼඉϨϱԿΨϨβϊέϪ
Ψοχ͖ΔϙηϙϠόΦητϩܗ९ΝՆ͵εϱϕϩͲްིద͵घ๑Νͪ͢ɽ
Ͷ༽͏Ζ֦ώρϓΟʖܧΝݗ౾ͪ݃͢ՎɼϛϨΠϝϱͲ͍ΖϕφϪεϱΝశՅͪ݃͢
ӹɼજ༻ӹͶ0JΝశՅͪ͢%LV7ULV؉ুӹɼ༻ड़ӹͶϒϫϨϱ༻ӹ͗ΨϨβϊέϪΨ
οχͶͺ࠹నͲ͍Ζͳ͖ͮͪɽ࠹నԿͪ͢ώρϓΟʖͲܧͺɼ3KRVWDJ͗ՃϨ
ϱخΝಝҡదͶำଌՆͲ͍Ζ͞ͳΝཤ༽͢ͱɼඉΨϨβϊέϪΨοχɼඉϨϱԿΨϨ
βϊέϪΨοχɼϨϱԿΨϨβϊέϪΨοχͶժՆͲ͍ͮͪɽ3KRVWDJ7LS๑ͺɼళ
ષ;ٶܗԿָर২ΨϨβϊέϪΨοχͶͯ͏ͱɼͨΗΔඉϨϱԿΨϨβϊέϪΨοχ͖
ΔϨϱخΝ༙ͤΖΨϨβϊέϪΨοχΝՆͲ͍Εɼͪ͢ࢾྋͺॴཀྵ
གྷͲɼͨΉΉ/&06Ν༽͏ͱੵՆͲ͍ΖɽΉͪɼඉΨϨβϊέϪΨοχɼඉϨϱ
ԿΨϨβϊέϪΨοχɼϨϱԿΨϨβϊέϪΨοχͶժՆͲ͍ΖͪΌɼߑଆਬఈͶ
༙༽Ͳ͍Ζͳߡ͓ΔΗΖɽ
ҐΓΕɼ3KRVWDJ7LS๑ͳ/&06ૌΊΚͦͪघ๑ͺɼ֫ҫ༂Ͷ͕͜Ζझʓ
ΨϨβϊέϪΨοχϙηϙϠόΦητϩܗ९ΝಝҡదͶੵͤΖ͞ͳ
Ͳ͘Ζ͢͏νϕੵ๑ͳ͢ͱ༙༽Ͳ͍Ζͳߡ͓ΔΗΖɽ͞घ๑Ν༽͏ͪੵΝ௪
ͣͱ֫ҫ༂Ͷ߫͘ͲݛΖ͞ͳΝ͏ͱͮبΖɽ
ʴݬஸชʵ
0DVD\D7VXQHKLUR.HQML6DVDNL(PLNR.LQRVKLWD.LNXWD(LML.LQRVKLWD7RKUX.RLNH
3KRVWDJEDVHGPLFURSLSHWWHWLSPHWKRGIRUDQDO\VLVRISKRVSKRPRQRHVWHUW\SH
LPSXULWLHVLQV\QWKHWLFROLJRQXFOHRWLGHV-RXUQDORI&KURPDWRJUDSK\%
7
2.
֫ҫ༂ͺɼؠɼৼ݄؇;ٶେः࣮׳ɼਈ্֒ܨɼʹ͵׳࣮ء߁ҕనԢΝ࣑ྏ
ͤΖ͞ͳ͗Ͳ͘ΖՆ͍Ζҫ༂Ͳ͍Εɼ͞ΗΉͲ࣑ྏ͗ೋ͖ͮͪ͢Ҫఽ࣮׳Ώೋ࣑
࣮׳ͶଲͤΖ࣑ྏްՎ͗غଶͲ͘Ζ͞ͳ͖ΔɼΠϱϟρφϟυΡΩϩωʖθͶ͓ͪ͞ΖϠ
ξϨτΡͳ͢ͱΝॄΌͱ͏Ζɽ֫ҫ༂ͺॊཔҫ༂͗ඬదͳͤΖνϱϏέ࣯ͳͺ
ҡ͵Εɼͨླྀ '1$ ͍Ζ͏ͺ 51$ ϪϗϩͲਫ਼ରΝ͘ͲޜΖ఼͗͘͵ಝͲ͍Ζɽ
֫ҫ༂ͺɼߑଆΏࡠ༽ؽҡ͵Ζଡ༹͵֫ҫ༂͗͠Ηͱ͕Εɼන Ͷࣖͤ௪
Εɼࡑݳɼྡজ͗ߨΚΗͱ͏ΖͶݸఈ͢ͱɼΠϱοιϱηɼVL51$ɼPL51$ɼ
υαɼΠϕνϜʖɼ&S* ΨϨβঙ͵͚ͳ झྪ͗ଚࡑ͢ͱ͕Εɼන Ͷࣖͤ௪Εɼ
͑ͬ͞ΠϱοιϱηɼVL51$ɼΠϕνϜʖɼ&S* ΨϨβ झྪ͗عͶࣰ༽Կ͠Ηͱ͏
Ζɽ͞ΗΉͲͶট͠Ηͪ֫ҫ༂ଡ͚͗Πϱοιϱηҫ༂Ͳ͍ΕɼྡজஊͶ͍
ΖޫึͶ͕͏ͱΠϱοιϱη͗࠹ޫึ਼͗ଡ͏ɽ࣮׳ͳ͢ͱͺɼҪఽ
ʀسঙ࣮׳͚͢ͺ͗Ξ͗ଡ͚ɼΠϱϟρφϟυΡΩϩωʖθ߶͏ҮͲ͗ΌΔ
Ηͱ͏Ζɽ
න ֫ҫ༂ྪ
Πϱοιϱη
VL51$
PL51$
υα
ΠϕνϜʖ
&S* ΨϨβ
ߑଆ
ຌ࠱
ຌ࠱ 51$
ຌ࠱ 51$
ຌ࠱ '1$
ຌ࠱
ຌ࠱ '1$
'1$51$
'1$51$
Ԛخௗ
ఖౕ
ఖౕ
ఖౕ
ఖౕ
ඬద
P51$
ɼ P51$
P51$
νϱϏέ࣯
νϱϏέ࣯
νϱϏέ࣯
ʤࣺҾࢢʥ
ʤࡋ๖ࡋ
ʤ7/5ʥ
SUHP51$ ɼ
PL51$
๖නνϱϏ
έʥ
ࡠ༽෨Ғ
ࡋ๖಼
ࡋ๖಼
ࡋ๖಼
ࡋ๖಼
ࡋ๖಼
ࡋ๖ʤΦϱ
χλʖϞ಼ʥ
8
න ট͠Ηͪ֫ҫ༂
ঐ໌
ྪ
Ԛخௗ
Կָर২
টࠅ೧
నԢ
౦༫ܨ࿑
9LWUDYHQH
Πϱοιϱη
6 Կ
86
&09 ຜԎ
ࢢର಼
86
ᕹड़
ࢢର಼
(8
Յྺԭ൙ร
(8
0DFXJHQ
ΠϕνϜʖ
b)ɼ b20H
3(*
-3
.\QDPUR
Πϱοιϱη
6 Կɼ b02(
86
ϙϠંܗՊଔ
ൿԾ
߶αϪητϫʖϩ݄
([RQG\V
Πϱοιϱη
ϠϩϓΧϨό֫
86
Πϱοιϱη
੫ຼ಼
۔ζηφϫϓΡʖ
6SLQUD]D
υΡεΥϱϊܗ
6 Կɼ b02(
86
ਹ۔Ҧक़
ਹߤ಼
(8
-3
+(3/,6$9
&S* ΨϨβ
6 Կ
86
% ܗ،Ԏʤ༩ʥ
۔಼
Πϱοιϱη
6 Կɼ b02(
86
Ҫఽ $775
ൿԾ
(8
Πϝϫχʗεη
86
Ҫఽ $775
(8
Πϝϫχʗεη
%
7HJVHGL
2QSDWWUR
VL51$
b20H
/13
੫ຼ಼
-3
:D\OLYUD
Πϱοιϱη
6 Կɼ b02(
(8
Պଔ
ൿԾ
߶Ωϫϝέϫϱ݄
9LOWHSVR
Πϱοιϱη
ϠϩϓΧϨό֫
-3
υϣεΥϱϊ۔ܗζ
ηφϫϓΡʖ
9
੫ຼ಼
ຌͲڂݜͺɼ֫ҫ༂Ͳ࠹ଡࣰ͚༽Կ͠Ηɼޫึଡ͏ɼΠϱοιϱηʤ
ຌ࠱ '1$51$ʥΝνʖΰρφͶࣰݩΝΌͪɽͨخຌߑଆͺɼਦ Ͷࣖͤɼ ౸Ͷ֫
Ԛͪ݃͗͢خϊέϪΨοχ͗ϙηϙζΦητϩ݃Νղ͢ͱͯ͵͗ͮͪΨϨβϊέϪ
ΨοχͲ͍Ζɽళષ֫ࡏͶͺɼ
͖Δ
ଈ͜ͱ࠱͗Ԉௗ͠Ηͱ͏͚Ҳ๏Ͳɼ
ԿָͶͺʹͬΔ͘Ͷ৵ͻͤ͞ͳ͗ݬཀྵదͶՆͲ͍Ζ͗ɼళષͳͺٱͶ
ଈ
͖Δ
ଈ࠱ΝԈௗ͢ͱ͏͚ίʖη͗ଡ͏ɽ͞Ηͺɼ
ϐχϫΫε͗خҲ͍ͲڅΖͪΌͶ
ൕԢ͗߶͚ɼԈௗൕԢ͗ߨ͏Ώͤ͏ͪΌͲ͍ΖɽΨϨβϊέϪΨοχͶͺɼଐౕΏ
ࡠ؈ส͠ͳ͏ͮͪ؏఼͖Δɼݽ૮๑͗༽͏ΔΗΖ͞ͳ͗ҲൢదͲ͍Ζɽਦ Ͷݽ૮
๑֕ྲྀਦΝࣖͤɿݽ૮๑ͳͺɼ࠹ॵୱྖରʤΠϝξφʥΝɼݽର୴ରʤΪϧ
ηϑʖθ͵ʹʥͶ݃ͦͪ͠ͲɼൕԢ఼୦ฯޤʀୱྖରΝචགྷ͵յ਼܃Εศͤɽ͞
͑͢ͱϊέϪΨοχ࠱Νௗͦͪ͠Ͳɼ࠹ޛͶસର୦ฯ୴;ٶޤର͖ΔΕड़͢Νߨ
͏ɼదΨϨβϊέϪΨοχΝಚΖͳ͏͑๏๑Ͳ͍Ζɽ͖͢͢ɼݽ૮๑Ͳͺɼસͱ
ൕԢ͗ϑʖθͲߨ͢ɼգࢾ༂ΏൕԢͲਫ਼ͣΖ෯ਫ਼͵ʹͺજॴཀྵͶΓͮͱ؈ส
Ͷঈ͘ͲڊΖͪΌ൧ࡸ͵ࡠͺචགྷ͵͚ɼਟଐ͖ͯঙ͵͏घؔͲద͗ಚΔΗΖ͗ɼ
ؽճ͗ݸఈ͠ΗΖɽద࣯ΨϨβϊέϪΨοχͳͨྪԓ࣯ཀྵԿָద࣯ͺࣇ
ͱ͏ΖͪΌɼྪԓ࣯ʤ९ʥʙͶͺݸֆ͍͗Ζɽॊͮͱɼ֫ҫ༂ͺҲൢద
͵Կָҫ༂ͳർֳ͢ͱɼ९ིࠠ͗߶͏ܑͶ͍Εɼࡑݳੵٗढ़Ͳͺɼ֦
ྪԓ࣯ΝݺพͶ؇ཀྵͤΖ͞ͳͺࠖೋͲ͍Ζίʖη͗ଡ͏ɽ֫ҫ༂ΨϨβϊέϪΨο
χ༟པ९Ͷͺ 1 ͵ʹ࠱ௗҡ͵ΖΨϨβϊέϪΨοχʤϊέϪΨεχܿଝରʥɼ
Ҳ෨Ԛܿ͗خཚͪ͢୦ԚخରɼϙηϙζΦητϩ݃࿀ର͵ʹ༹ʓ͵֮͗͠Η
ͱ͏Ζɽ͞దΨϨβϊέϪΨοχ༟པ९ੵͺɼ͢͏༙ް༙ҫ༂
Ͷ͕͏ͱۅΌͱ॑གྷͲ͍Ζɽ఼͞Ͷؖ͢ɼࣰݳద͵ҕͲɼंͺɼଚࡑͤΖͺଚ
ࡑͤΖՆ͗߶͏ͤ΄ͱ९ߑଆΝ໎Δ͖ͶͤΖͪΌͶྙͤΖ͞ͳ֦͗ࠅو
ۃΓΕٽΌΔΗΖɽͨͪΌɼҲൢదͶͺɼܨ࿑͕Γ;ͨԿָรԿࡋ͵ཀྵմɼ
ड़࣯͕Γ;ड़࣯९Ͷͯ͏ͱஎࣟɼ͕Γ;Ն͍Ζմܨ࿑ཀྵմ͗ච
གྷͳ͵Ζɽ͞ΗΔๅͺɼ९ಝմੵࣰݩͶ͚ͰخմੵϕϫιηΝ͚ͪΌͶ༽͏
10
ΔΗΖɽͨմੵϕϫιηͺ९ୱͺೳक़ɼԿָద;ٶཀྵԿָదՃɼ͖֮͵
ͶΓΖߑଆ֮͵ʹɼ༹ʓ͵ఖ͖ΔΖͪΌɼ९સ͵ߑଆ݀ఈͺɼҫ༂
Ͷ͕͏ͱɼࠖೋ͵ଈ ͯͳ͠Ηͱ͏Ζɽ
ΉͪɼళષΨϨβϊέϪΨοχͺɼϊέϪΠʖκͶΓΕਫ਼ର಼ͲͺଐΏ͖Ͷմʀഋड़
͠Ηͱ͢Ή͑ͪΌɼϊέϪΠʖκଳΏඬదഓͳ݃Νదͳ͢ͱɼ
ΨϨβϊέϪΨοχԿָर২Ώ༹ʓ͵ࢢՅ͵ʹ͗͠ڂݜΗͱ͏Ζɽ֫
Կָर২Ͷͯ͏ͱͺɼ౸෨र২ɼϨϱ෨र২ɼԚخ෨र২͵ʹ͗͠ڂݜΗͱ͏Ζɽ
౸෨र২ͳ͢ͱͺɼbҒर২ͳՏܗڰर২͍͗ΕɼbҒर২ͺɼ
)ɼ
20HWK\O
ʤ
20Hʥ
ɼ
20HWKR[\HWK\Oʤ
02(ʥ͵ʹ͗Γ͚எΔΗͱ͏Ζɽ
20H र২֫
ߑଆΝਦ ͶࣖͤɽՏܗڰर২దͺɼ༵Δ͙͍Ζ౸෨ཱིରഓ࠴ΝՏڰͶΓΕݽఈ
ԿͤΖͪΌͲ͍Εɼ౸෨ bҒͳ bҒΝԿָదͶՏͤڰΖ͞ͳͶΓΕɼ૮ึ࠱ͳ݃ྙ͗
ͤΖͳͳͶɼཱིର্֒ͶΓΕϊέϪΠʖκଳͤΖɽՏͱ͢ͳ֫ܗڰͺɼҲ
ൢదͶ /1$ʤ/RFNHG1XFOHLF$FLGʥ
ɼ(1$ʤ
2ɼ
&(WK\OHQHEULGJHG1XFOHLF$FLGVʥ
͵ʹ͗Γ͚எΔΗͱ͏Ζɽ/1$ र২֫ߑଆΝਦ ͶࣖͤɽϨϱ෨र২ͳ͢ͱͺɼ
2ʤોࢢݬʥΝ 6ʤོԭࢢݬʥͶͪ͢ϙηϙϫοΨΦʖφԿʤ6 Կʥ͗Γ͚எΔΗͱ
͕ΕɼϊέϪΠʖκଳΏࢹ༻͗ଁͤ͞ͳ͖Δࡋ๖಼खΕࠒΊްིրવͤΖ
ͳߡ͓ΔΗͱ͏Ζɽ͞Γ͑Ͷଡ͚Կָर২͗͠ڂݜΗͱ͕Εɼ༂ۂةΏָͲ༹ʓ
͵ΨϨζψϩर২֫͗͠Ηͱ͏Ζɽ͞Կָर২Ͷ͑९Ͷͯ͏ͱɼಋ༹Ͷ
ੵͤΖචགྷ͍͗Ζ͗ɼళષܗΨϨβϊέϪΨοχͳർֳ͢ͱɼΓΕ९ޫึ͗ଡ͚
͵ΕࡸͶ͵Ζͳఈ͠ΗΖɽ
11
/1$
خຌߑଆ
b20H
ਦ ֫ҫ༂خຌߑଆ
㻰㻹㼀㼞㻻
㻻
㻻
㻴㻻
䠞
㻻㼀㻮㻰㻼㻿
䠞
㻻
1. ⬺ಖㆤ
㻰㻹㼀㼞㻻
㻻
㻻㻰㻹㼀㼞
㻻
㻺
䠞
㻭㼏㻻
㻻
㻻㼀㻮㻰㻼㻿
㻻 㻼
㻻 㻻
㻻 䠞
㻻
4. ...