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Cancer-associated fibroblasts confer invasiveness and migratory capacity in gastric cancer

安川, 佳美 東京大学 DOI:10.15083/0002007082

2023.03.24

概要

[課程-2]
審査の結果の要旨
氏名

安川

佳美

本研究は、がん環境において誘導された特有の形質を保持し、がんの発生・浸潤・転移に
重要な役割を担っていると考えられている、がん関連線維芽細胞(CAF)の持つ特徴を明らか
にするため、胃がんの切除検体から樹立した CAF と、同一検体での非がん部由来の線維芽細
胞との多面的な比較を行うことによって、胃がん CAF に特異的なジェネティック・エピジェ
ネティック変化の同定を試みたものであり、下記の結果を得ている。
1. 胃がんのがん関連線維芽細胞(CAF)において、非がん関連線維芽細胞(NCAF)と比較して
高発現となる遺伝子の一つとして SAA1 が同定された。SAA1 を過剰発現させた NCAF に
おいては、胃がん細胞の遊走能・浸潤能が有意に促進され、一方で SAA1 をノックダウ
ンした CAF では、元々保持していた腫瘍促進作用が減弱することが示され、SAA1 が CAF
に固有の形質を形成する重要な因子の一つであると考えられた。
2. 胃がん CAF における SAA1 の発現上昇のメカニズムとして、エンハンサーアセチル化の
関与が示された。エンハンサー領域におけるヒストンアセチル化と、種々の転写調節因
子を介したエンハンサー活性化により SAA1 が高発現となり、これはがん環境から離れ
ても保持されうるエピゲノム変化であると考えられた。
3. エンハンサー活性を抑制する作用を持つブロモドメインインヒビターにより、CAF にお
ける SAA1 発現およびエンハンサーのヒストンアセチル化、CAF のがん浸潤促進作用は
いずれも低下を認め、がん間質をターゲットとした治療戦略の一つとして、エンハンサ
ーアセチル化の阻害が有用である可能性が示された。
以上、本論文は胃がん CAF に着目したジェネティック・エピジェネティック解析から、CAF
の形質の保持に重要と考えられる遺伝子 SAA1 を同定し、その発現上昇にエンハンサーアセ
チル化が関与することを明らかにした。さらに、このエンハンサー活性化のメカニズムは、
近年高い関心を集める、がん間質を標的とした治療の可能性を提示するものであり、主に上
皮細胞をターゲットとしてきた従来治療を補完し、強化するものとして期待される。
よって本論文は博士(医学)の学位請求論文として合格と認められる。

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Table 1. Primers for RT-qPCR and ChIP-qPCR

Experiment

RT-qPCR

ChIP-qPCR

Region

Primer sequence

Forward

Reverse

SAA1 exon 3-4

TGCCTGGGCTGCAGAAGTGA

TGATCAGCCAGCGAGTCCTC

GAPDH exon 2-3

AGGTGAAGGTCGGAGTCAACG

AGGGGTCATTGATGGCAACA

SAA1 enhancer 1

GCAAAGTGAACGAGCTTCGG

CTCCACCCACTCTCTCAGGA

SAA1 enhancer 2

GACGACAGTCAGGAGCTCAC

CATGTCCCCTCCCATTCCAG

SAA1 promoter

CCAGGCACATCTTGTTCCCT

AGTCCCTGCAGGTCATTTCC

Table 2. Oligonucleotide sequences for shRNA

Region

sh1

sh2

SAA1 exon 3

SAA1 exon 4

Oligonucleotide sequence

Top

Bottom

GATCCAAGCCAATTACATCGGCT

AATTCAAAAAAAGCCAATTACA

CAGACAAACTTCCTGTCAGATT

TCGGCTCAGACAAATCTGACAG

TGTCTGAGCCGATGTAATTGGCT

GAAGTTTGTCTGAGCCGATGTA

TTTTTTG

ATTGGCTTG

GATCCGTGATCAGCGATGCCAG

AATTCAAAAAGTGATCAGCGAT

AGAGAATCTTCCTGTCAGAATT

GCCAGACACAATTCTGACAGGA

CTCTCTGGCATCGCTGATCACTT

AGATTCTCTCTGGCATCGCTGAT

TTTG

CACG

44

Table 3. Deposited Data from ChIP-Atlas

Source

Identifier

ChIP-seq, human fibroblast, H3K4me1

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/

GSM2550214

ChIP-seq, human fibroblast, H3K27ac

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/

GSM2214081

ChIP-seq, MSC, MED1

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/

GSM2802953

ChIP-seq, Detroit 562, RELA

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/

GSM2419817

ChIP-seq, MCF 10A, NFB1

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/

GSM3184663

ChIP-seq, MCF 10A, STAT3

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/

GSM3184665

45

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