コーヒー分析時のオクラトキシンAに関連する不明ピーク（OTA‐X）の毒性評価

概要

An unknown peak (OTA‐X) was often observed in the chromatogram of ochratoxin A (OTA) analysis in roasted coffee, which was delayed by about 2 minutes from the peak of OTA. OTA‐X was estimated to be a compound similar to OTA because it bound to immunoaffinity column (IAC) for OTA, had a retention time close to that of OTA, and a fluorescence similar to OTA. Therefore, OTA‐X was isolated and a toxicity test was conducted on HepG2 cells to compare the cytotoxicity of OTA. First, as a result of examining the production conditions of OTA‐X, it was found that Arabica coffee beans was better substrate and shallow roast was good. From this roasted coffee, 6 µg of purified OTA‐X was obtained by IAC cleanup and preparative HPLC. As a result of the toxicity of OTA in HepG2 cells, it was revealed that the toxicity was about 100 times stronger when serum was not added. As a result of the cytotoxicity of OTA‐X under these conditions, OTA‐X had almost the same cytotoxicity to HepG2 cells as OTA. OTA‐X present in roasted coffee was found to have almost the same level of cytotoxicity as OTA. It was suggested that it was necessary to evaluate in.
コーヒー製品のオクラトキシンA（OTA）分析のクロマトグラムにはOTAより約2分遅れて不明なピーク（以下OTA‐X）が観察された。OTA‐Xは、IACと結合すること、OTAとリテンションタイムが近いこと、OTAと類似した蛍光を持っていることからOTAと類似の化合物と推定された。そこで、OTA‐Xを単離して、HepG2細胞での毒性試験を行い、OTAとの細胞毒性の強さを比較した。まず、OTA‐Xの生成条件を検討した結果、アラビカ種の生豆に A. ochraceus を植菌・培養し、滅菌・乾燥後に酸味・浅め焙煎したときに最大になることを確信した。この焙煎コーヒーからIACでのクリーンアップと分取HPLCで精製OTA‐Xを6µgを得た。HepG2細胞でのOTAの毒性試験を行った結果、血清を添加しない方が毒性が約100倍強くでることを明らかにした。この条件でOTA‐Xの細胞毒性試験を行った結果、OTA‐XはHepG2細胞に対してOTAとほぼ同程度の細胞毒性を有してた。焙煎したコーヒー中に存在するOTA‐XはOTAとほぼ同程度の細胞毒性を有していることが明らかになったので、コーヒーのOTAのリスク評価を行う場合はOTA‐Xとの合計量で評価する必要性が示唆された。

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