マウス前駆脂肪細胞3T3-L1に対する漢方薬 加味逍遙散の脂肪蓄積抑制機構の解明

概要

脂肪組織における脂質代謝異常は種々の疾患発生と進行に密接に関連している。肥満発生の機序は、過食によるエネルギーの過剰摂取状態と運動不足により、間葉系幹細胞から成熟脂肪細胞への分化が促進し、過剰に脂肪を蓄積し肥大化する複雑な過程を経る。従って、成熟脂肪細胞への分化の過程を制御することは、過度な脂肪蓄積を抑制する点で重要な意味を持つ。加味逍遙散(KSS)は、更年期障害、月経困難症、神経症及び癌の支持療法に使用されてきた伝統的な日本の漢方薬である。KSSが有効性を示す疾患の増悪に、体重の増加や脂肪細胞より分泌されるホルモンやサイトカインが関与している。また、ヒト肝癌由来HepG2細胞でKSSが細胞内のトリグリセリド量を減少させたと報告されているが、脂肪細胞に対するKSSの分子薬理学的作用機序は不明な点が多い。これらのことから、この研究では、マウス前駆脂肪細胞3T3-L1に対するKSSの分子薬理学的作用を明らかにすることを目的にした。本研究では、マウス前駆脂肪細胞3T3-L1を使用し、Dexamethasone (Dex)、3-Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX)、insulinよりなる分化誘導剤(DMI)を添加し、成熟脂肪細胞へと分化を誘導した。成熟脂肪細胞への分化度の評価にOil-Red-O染色法を使用した。KSSが3T3-L1細胞数へ及ぼす影響を評価するためにCell CountingKit-8(CCK-8)を用いた。分化マーカー遺伝子の発現解析にqPCRを用いた。Glucocorticoid receptor (GR)プロモーター活性は、分化誘導剤の1つでGRのリガンドとして作用するDexを添加した3T3-L1細胞を用いて、Luciferase reporter assayにて評価した。KSSは分化中の脂肪細胞に作用し、細胞内脂肪蓄積量を濃度依存的に減少させた。KSSは10mg/mL以下では細胞数に影響を及ぼさなかった。更に、KSS構成生薬の牡丹皮(BTP)及びBTPの主要成分であるpaeonolがKSSと同様に濃度依存的に細胞内脂肪蓄積量を減少させた。分化マーカー遺伝子の発現解析では、KSS、BTP、paeonolが分化誘導3日目にCCAAT/enhancer-binding proteins-delta (C/EBP-δ)の遺伝子発現を抑制した。GRプロモーター活性の評価ではKSS、BTP、Paeonolが、GRの活性化を抑制した。以上のことは、KSSがマウス3T3‐L1細胞の分化初期過程において、DexによるGRの活性化を阻害することで、C/EBP-δ遺伝子の発現を抑制し、結果成熟脂肪細胞への初期分化を抑制することで脂肪蓄積量を減少させることを示唆する。また、KSSによる脂肪蓄積抑制効果は、構成生薬であるBTP、主要成分であるpaeonolが担っている可能性が明らかになった。