Generation of knockout rabbits with X-linked severe combined immunodeficiency (X-SCID) using CRISPR/Cas9

概要

〔目的(Purpose)〕
ウサギはマウスに比べ大型な為手術が比較的容易で、長期観察可能な前臨床試験に適した実験動物である。本研究ではCRISPR/Cas9システムにて移植免疫に重要なインターロイキン2受容体γ鎖（Il2rg）遺伝子をターゲットとしたX-SCIDKOウサギの開発を試みた。

〔方法ならびに成績(Methods/Results)〕
ウサギIl2rg遺伝子のエクソン2にgRNAをデザインし、自然交配したウサギより採卵、Cas9mRNA、gRNAを前核にインジェクションし、その胚を偽妊娠ウサギへ移植した。得られた産仔からシークエンス解析により変異個体を同定し、F2のヘミ（Il2rg-/Y）個体、WT（Il2rg+/Y）個体を用い、体重測定、血液一般性状、T細胞・B細胞のFACS解析を行った。また剖検後、胸腺の有無を確認した。その結果、移植した438個の受精胚から52匹の産仔が得られ、14匹の変異個体が確認された。25週齢までの体重測定では、WT個体の体重が増加傾向であるのに対しヘミ個体は15週頃から体重増加率が低下した。血液一般性状では、全ヘミ個体でリンパ球減少が認められ、FACSではT細胞（WT9.6％、ヘミ0.2％）、B細胞（WT11.8%、ヘミ-0.05％）となり、ヘミ個体で有意に低下した。剖検の結果、全ヘミ個体で胸腺が低形成である事を確認した。

〔総括(Conclusion)〕
Il2rg遺伝子をターゲットとして作製したX-SCIDウサギは免疫不全である事が予想され、移植実験等において有用である事が示唆された。