論文の公開元へCD79B Y196 mutation is a potent predictive marker for favorable response to R-MPV in primary central nervous system lymphoma
概要
主論文の要旨
CD79B Y196 mutation is a potent predictive marker
for favorable response to R-MPV
in primary central nervous system lymphoma
中枢神経系原発悪性リンパ腫におけるCD79B Y196変異は
R-MPV療法の良好な反応性を予測する
名古屋大学大学院医学系研究科
脳神経病態制御学講座
総合医学専攻
脳神経外科学分野
（指導：齋藤 竜太
山口 純矢
教授）
【緒言】
中枢神経系原発悪性リンパ腫(PCNSL)は全脳腫瘍の約 3%を占める稀な悪性脳腫瘍
であるが、高齢化に伴い、その発生数は増加している。多くの悪性脳腫瘍と異なり、
化学療法、放射線療法に感受性が極めて高いため、手術は診断目的の生検術にとどめ、
放射線化学療法の速やかな導入が一般的な治療方針である。かつては極めて予後不良
な疾患であったが、近年の化学療法の発達に伴い予後は改善してきており、現在は減
量放射線療法を併用したリツキシマブ 、高容量メトトレキサート(HD-MTX)、プロカ
ルバジン 、ビンクリスチンを用いた多剤併用化学療法(R-MPV 療法)が広く実施され
ている。しかしその希少性から、R-MPV 療法と従来行われていた HD-MTX 療法の長
期予後を比較したデータは十分には存在していない。また、近年の網羅的遺伝子解析
の結果、PCNSL では MYD88 L265P 変異と CD79B Y196 変異が高頻度に観察されるこ
とが示されたが、その臨床的意義については十分に解明されていない。そこで我々は、
85 例の初発 PCNSL の長期予後、MYD88 L265P 変異、CD79B Y196 の変異と予後の関
係性についての検討を行い、これらの遺伝子変異の迅速解析システムの開発を行った。
【対象及び方法】
2009 年から 2020 年の期間で、名古屋大学医学部附属病院、名古屋医療センター、
日本赤十字社愛知医療センター名古屋第二病院、江南厚生病院、豊橋市民病院、安城
更生病院で治療を受けた 85 例の初発 PCNSL について後方視的にデータ収集を行っ
た。64 例が R-MPV 療法、21 例が HD-MTX 療法を実施された。R-MPV 療法で治療を
受けた 64 例のうち 17 例は検証コホートとして使用した。全ての症例の腫瘍検体から
DNA を抽出し、droplet digital PCR 法を用いて MYD88 L265P 変異、CD79B Y196 変異
の有無を調べた。迅速診断システムの解析基盤には i-densy を使用した。本システムで
は、対象遺伝子配列にプローブがハイブリダイズした状態では消光状態となり、遊離
すると蛍光を発する特殊蛍光を融合させたプローブを用いている。対象遺伝子配列が
野生型と変異型でプローブの遊離する温度が異なることを蛍光のピークとして捉え、
遺伝子変異を検出している。
【結果】
47 例の R-MPV 治療群と 21 例の HD-MTX 治療群の比較を行った。両群間の背景で、
性別以外に有意な差は認めなかった。完全奏功率は R-MPV 治療群の 85.1%に対し、
HD-MTX 治療群では 47.6%であった。R-MPV 治療群の 5 年無増悪生存率と全生存率は
それぞれ 61.6%と 69.9%であり、HD-MTX 治療群の 5 年無増悪生存率と全生存率 23.8%
と 45.6%であった。ログランク検定では、R-MPV 治療群は HD-MTX 治療群と比較し
て、無増悪生存期間、全生存期間いずれも有意に延長していた(P < 0.001 と P = 0.021;
Figure 1A)。
遺伝子解析の結果、R-MPV 治療群のうち 33 例(70.2%)に MYD88 L265P 変異を、19
例(40.4%)に CD79B Y196 変異を認めた(Figure 1B)。これらの遺伝子変異の予後への
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影 響 を 検 討 し た 。 R-MPV 治 療 群 に お い て 、 MYD88 L265P 変 異 は 無 増 悪 生 存 期 間
(P = 0.19)と全生存期間(P = 0.34)に有意な関連は認めなかった(Figure 2A)。一方、
R-MPV 治療群において、CD79B Y196 変異は無増悪生存期間(P = 0.028)と全生存期間
(P = 0.040)の延長に有意な関連を示した。しかしながら、この CD79B Y196 変異にお
ける予後との関連性は、HD-MTX 治療群では認められなかった(Figure 2B)。CD79B
Y196 変異は R-MPV 療法に対する良好な反応性を予測する因子であることを意味する
と考えられた。この結果を検証するために、R-MPV 療法で治療された 17 例の初発
PCNSL を追加登録し、CD79B Y196 変異と予後の関連性を検証したところ、有意差は
認 め な か っ た が 、 同 様 の 傾 向 が 示 さ れ た (無 増 悪 生 存 : ハ ザ ー ド 比 = 0.54 [95% CI,
0.18–1.69], P = 0.228, 全生存: ハザード比 = 0.27 [95% CI, 0.08–0.95], P = 0.064)。
MYD88 L265P 変異と CD79B Y196 変異は脳腫瘍においては、PCNSL の診断マーカ
ーとして利用でき、CD79B Y196 変異は R-MPV 療法の良好な反応性の予測マーカーと
して利用が可能であり、これらの遺伝子変異の迅速解析系の開発を行った。MYD88
L265P 配列と野生型 CD79B 配列に対するプローブを設計し、i-densy で解析を行い、
条件検討を行った。MYD88 L265P 変異に対するピークは 67 °C で、CD79B Y196 変異
に対するピークは 57 °C で観察され、1mg の凍結検体から 90 分以内に変異を同定する
ことが可能であった。PCNSL が疑われ生検術が予定された連続４症例において、摘出
した検体の解析を行い、90 分以内に MYD88 L265P 変異と CD79B Y196 変異が正確に
同定できることを確認した(Figure 3)。
【考察】
今回、我々は初発 PCNSL85 症例を解析し R-MPV 療法の長期的な予後と遺伝子異常
の関連性を検証した。MYD88 L265P 変異と予後の関連性はこれまでもいくつかの報告
で、予後との関連性は認めないことが示されている。一方、CD79B Y196 変異と予後の
関連性は、報告によって結論が異なっていたが、治療法が統一された多くの症例数を
含むコホートによる報告からは、CD79B Y196 変異は良好な予後と関連があることが
示されていた。今回我々は、R-MPV 治療群と HD-MTX 治療群の各群内で CD79B Y196
変異と予後の関連性を検証し、CD79B Y196 変異が R-MPV 療法の良好な反応性を予測
する因子であることを見出した。CD79B Y196 変異により R-MPV 療法の反応性が向上
する分子メカニズムについては明らかではないが、CD79B Y196 変異により活性化し
た mTOR 経路を、リツキシマブが有効に阻害する可能性があること、B 細胞受容体シ
グナルの活性化による CD20 の発現量変化が関与している可能性があることを考察し
た。今後のさらなる基礎的研究が必要である。
本研究で樹立された MYD88 L265P 変異と CD79B Y196 変異の同時迅速解析システ
ムにより、迅速に PCNSL の分子診断と R-MPV 療法の感受性を予測することが可能で
あり、生検術の精度の向上、術後迅速な化学療法の導入、CD79B Y196 変異を軸にした
治療の層別化に貢献することが期待される。
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【結論】
本研究では、PCNSL における R-MPV 療法の長期的な予後と、MYD88 L265P 変異と
CD79B Y196 変異の関連性について検証した。R-MPV 療法は優れた長期成績を示し、
CD79B Y196 変異は R-MPV 療法に対する良好な反応性の予測因子である可能性が示
された。また、これらの遺伝子変異の有無を迅速に判定するシステムを樹立し、90 分
以内に PCNSL の分子診断と R-MPV 療法後の予後予測が可能になった。
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Figure 1. Summary of clinical course and molecular characteristics of the rituximab, high-dose methotrexate
(HD-MTX), procarbazine and vincristine (R-MPV) cohort.
(A) Kaplan–Meier curve showing progression-free survival (PFS: upper) and overall survival (OS: lower) of patients
undergoing R-MPV (pink line) and HD-MTX (blue line) regimens. (B) Diagram showing initial response to R-MPV
(complete response [CR], partial response [PR], or progressive disease [PD]), histological molecular subgroup
(germinal center B-cell-like [GCB] or non-GCB type), CD79B Y196 and MYD88 L265P status, and PFS (months) and
OS (months) in each case. MYD88 L265P and CD79B Y196 mutations were identified by droplet digital PCR (ddPCR).
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Figure 2. Correlation of MYD88 L265P and CD79B Y196 mutations with survival.
(A) Kaplan–Meier curve showing progression-free survival (PFS; left) and overall survival (OS; right). The pink line
shows survival of patients with MYD88 L265P mutations and the blue line shows that of patients with wild-type MYD88.
The solid line indicates survival of patients treated with R-MPV and the dotted line indicates that of patients treated
with HD-MTX. (B) Kaplan–Meier curve showing PFS (left) and OS (right). The pink line shows survival of patients
with CD79B Y196 mutations and the blue line shows that of patients with wild-type CD79B. The solid line indicates
survival of patients treated with R-MPV and the dotted line shows that of patients treated with HD-MTX.
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Figure 3. Genotyping of MYD88 L265P and CD79B Y196 mutations using i-densy and droplet digital PCR
(ddPCR).
Genotyping of MYD88 L265P and CD79B Y196 mutations of four consecutive biopsies by i-densy (left) and ddPCR
(right). The fluorescence peak of MYD88 L265P mutation was confirmed at 67 °C and that of CD79B Y196 mutation
was found at 57 °C (black inverted triangle; left). The fluorescence peak of wild-type MYD88 or those of wild-type
CD79B were found at 56 °C or 60 °C, respectively. 2D cluster (right) plot of droplet fluorescence of MYD88 L265P
and wild-type MYD88 dots and those of CD79B Y196 and wild-type CD79B dots. FAM-positive and HEX-negative
droplets (blue) include MYD88 L265P or CD79B Y196. HEX-positive and FAM-negative droplets (green) include
wild-type MYD88 or wild-type CD79B. Cases 1 and 3 exhibited MYD88 L265P mutation (+) and CD79B Y196
mutation (-). Case 2 exhibited MYD88 L265P mutation (-) and CD79B Y196 mutation (-). Case 4 exhibited MYD88
L265P mutation (+) and CD79B Y196 mutation (+).
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