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３６
XI. 図表説明
図 1: 研究のデザイン及び検体処理・解析方法
(A) 研究のデザイン
LEN 治療開始時に肝腫瘍生検及び採血した血液検体を用いてリキッドバイオプシーを実
施した。さらに開始後 6-8 週時点でリキッドバイオプシーで cfDNA を解析し、造影 CT を撮
影して画像評価を行った。開始後 3-4 か月時点で再度造影 CT を撮影し、最終の画像評
価した。治療中断となった患者では、6-8 週時点が最終画像評価となった。
(B) 肝腫瘍検体と cfDNA の DNA 抽出と各遺伝子の解析方法
血液検体をヘパリンナトリウム入りの採血管に分注し、3,000 rpm で 10 分間遠心し、血漿
のみをコレクションバイアルに分注し DNA を抽出してリキッドバイオプシーを実施した。肝
腫瘍は 4 枚の厚さ 10μm の FFPE 切片から DNA 抽出し、TERT promoter はデジタル
PCR に、CTNNB1 と TP53 は NGS で解析した。
３７
図 2: 肝腫瘍検体と治療前 cfDNA における遺伝子変異の比較
3 つの遺伝子について上段は FFPE、下段はベースラインの cfDNA における VAFmean の
割合を視覚化して比較した。TERT promoter については-124C＞T、-146C＞T のそれぞれ
の VAF を表した。患者 6、12、15 は肝腫瘍生検を未施行であった。
３８
図 3: 各患者のベースライン及び治療開始後における cfDNA の遺伝子変異と画像評価
ベースラインと治療開始後 6-8 週時点での TERT promoter 変異の有無と、CTNNB1 及び
TP53 の VAFmean を表した。患者 14 は治療中断となったため、6-8 週時点のデータが欠
損している。棒グラフは各時点における各遺伝子変異を認めた患者の割合を示す。下段に
mRECIST 画像評価を示した。
３９
図 4: 遺伝子変異の有無と VAFmean の低下が無増悪生存期間に及ぼす影響の検討
(A) ベースラインの cfDNA における TERT promoter 変異の有無による無増悪生存期間
TERT promoter について、ベースライン cfDNA において変異を認める群と認めない群に分
け、無増悪生存期間を Kaplan-Meier 解析したところ有意差は認めなかった。変異有を赤
線、無しを青線で表した。
(B) 治療開始前後の VAFmean 低下による無増悪生存期間
CTNNB1 と TP53 について、治療開始前後で VAFmean が低下した群と、低下を認めなか
った群に分けて無増悪生存期間を Kaplan-Meier 解析したところ、有意差を認めなかった。
低下を青線、低下無しを赤線で表した。
(C)ベースラインの TERT promoter 変異の有無による病勢制御率
TERTpromoter 変異の有無により、PD とそれ以外の評価となった群で病勢制御率を検討し
たところ、有意差を認めなかった。
（Ｄ）VAFmean 低下による病勢制御率
CTNNB1 と TP53 の治療後の VAFmean 低下と病勢制御率の関連を調査した。CTNNB1
と、CTNNB1 及び TP53 を併せた total VAF mean の低下と病勢制御率は有意な相関を示
した。
４０
表 1: NGS で増幅したアンプリコン領域情報
(A) CTNNB1 のアンプリコン領域を示した。
(B) TP53 のアンプリコン領域を示した。
hg19: homo sapiens (human) genome assembly GRCh37, chr: chromosome
４１
表 2: 患者の臨床的特徴
本研究に登録された患者の臨床的特徴を示した。
※1 腫瘍個数は肝内の病変をカウントしているが、患者 12 は肝内に病変を認めずリンパ
節病変のみであったため合計が 19 症例となっている。
※2 患者 7、9、17、20 はそれぞれ Hepatic Artrial Infusion Chemotherapy (HAIC)、SFN と
REG、治験薬、 ATZ/BV の前治療歴を有していた。
HBV: hepatitis B virus, HCV: hepatitis C virus, BCLC stage: Barcelona Clinic Liver Cancer
stage, mALBI grade: modified ALBI grade, AFP: α-fetoprotein, PIVKA-II: protein induced
by vitamin K absence-II, RFA: radiofrequency ablation, TACE: transcatheter arterial
chemo embolization, SFN: sorafenib, REG: regorafenib, ATZ/BV: atezolizumab and
bevacizumab
４２
表 3: Cox 回帰分析による無増悪生存期間を予測する予後因子特定のための検討
単変量解析を行ったところ、全ての因子について有意差を認めなかった。
HBV: hepatitis B virus, HCV: hepatitis C virus, mALBI grade: modified ALBI grade, AFP:
α-fetoprotein, PIVKA-II: protein induced by vitamin K absence-II,VAFmean: variant allele
frequency mean
４３
表 4: 変異消失、VAFmean 及び腫瘍マーカー低下による PD 予測能の有用性についての
検討
TERT promoter は治療後の変異消失、CTNNB1 と TP53 及び既存の腫瘍マーカーである
AFP と PIVKA-II は、治療後 VAFmean 低下が治療に対する反応を予測するための特異度
や感度を調べた。変異の消失やマーカー及び VAFmean の低下を認めた症例のうち、治療
反応群の割合を治療効果予測率として示した。消失、低下を認めなかった症例のうち、治
療無効群の割合を治療無効予測率として表した。
mRECIST: modified Response evaluation criteria in solid tumors, PR: partial response, SD:
stable disease, PD: progressive disease, VAFmean: variant allele frequency mean, AFP: α
-fetoprotein, PIVKA-II: protein induced by vitamin K absence-II
４４
図1
４５
図2
４６
図3
４７
図4
４８
表1
(A)
(B)
４９
表2
５０
表3
５１
表4
５２
...
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