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25
26
Figure 1. トラスツズマブデルクステカンと Cancer-Immunity Cycle
A. トラスツズマブデルクステカン（T-DXd）の構造。
B. トラスツズマブデルクステカンの抗体薬物複合体としての作用機作。
C. Cancer-Immunity Cycle (23)。
27
28
29
Figure 2. シンジェニックマウスモデルにおいて、トラスツズマブデルクステカンは抗腫瘍
効果を示す
A. マウスがん細胞株である CT26.WT 細胞と EMT6 細胞にヒト HER2 （hHER2）を
安定発現させ
（CT26.WT-hHER2 細胞、EMT6-hHER2 細胞）、
各細胞における hHER2
の発現量を、フローサイトメトリーを用いて検出した。ヒストグラムは、各細胞の
hHER2 の発現量を示す。なお、発現量の目安として、ヒト乳がん細胞株である KPL4
細胞も同時に評価した。
B. CT26.WT-hHER2 細胞、EMT6-hHER2 細胞および KPL4 細胞を、non targeting ア
イソタイプコントロール抗体（control Ab）
、抗ヒト HER2 抗体（anti-hHER2 Ab）
non targeting アイソタイプコントロール抗体薬物複合体（control ADC）、またはト
ラスツズマブデルクステカン（T-DXd）存在下で 6 日間培養し、薬剤未処置の細胞を
100％として細胞の生存率（%）を算出した。グラフは平均値と標準誤差を示す
（triplicate）。
C. CT26.WT-hHER2 細胞、EMT6-hHER2 細胞および KPL4 細胞を DXd 存在下で 6 日
間培養し、薬剤未処置の細胞を 100％として細胞の生存率（%）を算出した。グラフ
は平均値と標準誤差を示す（triplicate）
D, E. CT26.WT-hHER2 細胞を BALB/c マウスに皮下移植し、腫瘍が生着した後、トラ
スツズマブデルクステカン（10 mg/kg）、抗ヒト HER2 抗体（10 mg/kg、D）または
non targeting アイソタイプコントロール抗体薬物複合体（10 mg/kg、E）を黒矢印
で示す日に尾静脈内投与し、その抗腫瘍効果を検討した。グラフは推定腫瘍体積の平
均値と標準誤差（n = 10）を示す。各試験終了日の推定腫瘍体積を用いて、ウィルコ
キソン順位和検定にて以下の群を比較した。
・トラスツズマブデルクステカン投与群と抗ヒト HER2 抗体投与群（D）
・トラスツズマブデルクステカン投与群と non targeting アイソタイプコントロール
抗体薬物複合体投与群（E）
F.
EMT6-hHER2 細胞を BALB/c マウスに皮下移植し、腫瘍が生着した後、トラスツズ
マブデルクステカン（10 mg/kg）、抗ヒト HER2 抗体（10 mg/kg）そして non targeting
アイソタイプコントロール抗体薬物複合体（10 mg/kg）を黒矢印で示す日に尾静脈内
投与し、その抗腫瘍効果を検討した。グラフは推定腫瘍体積の平均値と標準誤差
（n = 10）を示す。試験終了日の推定腫瘍体積を用いて、ウィルコキソン順位和検定
にて以下の群を比較した。
・トラスツズマブデルクステカン投与群と抗ヒト HER2 抗体投与群
・トラスツズマブデルクステカン投与群と non targeting アイソタイプコントロール
抗体薬物複合体投与群
30
31
32
33
Figure 3. トラスツズマブデルクステカンの抗腫瘍効果には、CD8 陽性 T 細胞を中心とし
た獲得免疫系が寄与している
A, B.
CT26.WT-hHER2 細胞（A）および EMT6-hHER2 細胞（B）をヌードマウスに皮
下移植し、腫瘍が生着した後、トラスツズマブデルクステカン（T-DXd、10 mg/kg）
を黒矢印で示す日に尾静脈内投与し、その抗腫瘍効果を検討した。グラフは、推定腫
瘍体積の平均値と標準誤差（CT26.WT-hHER2 細胞: n = 12、EMT6-hHER2 細胞:
n = 10）を示す。各試験終了日の推定腫瘍体積を用いて、スチューデントの t 検定（A）
またはウィルコキソン順位和検定（B）にてトラスツズマブデルクステカン投与群と
vehicle 投与群を比較した。
D. CT26.WT-hHER2 細胞を BALB/c マウスに皮下移植し、腫瘍が生着した後、トラス
ツズマブデルクステカン（10 mg/kg、1 回）を尾静脈内投与した。投与の 8 日後に腫
瘍を摘出し、フローサイトメトリーを用いて CD45、CD3、CD4、CD8 および
Granzyme B の発現を検出した。グラフは、生細胞に占める CD4 陽性 T 細胞の割合
（CD4+ T cells: CD45+CD3+CD4+ cells）
、CD8 陽性 T 細胞の割合（CD8+ T cells:
CD45+CD3+CD8+ cells）
、Granzyme B 陽性 CD8 陽性 T 細胞の割合および CD8 陽性
T 細胞に占める Granzyme B 陽性細胞の割合の平均値および標準誤差（n = 8）を示
す。スチューデントの t 検定にて、トラスツズマブデルクステカン投与群と vehicle
投与群を比較した。
D. CT26.WT-hHER2 細胞を BALB/c マウスに皮下移植し、腫瘍が生着した後、トラス
ツズマブデルクステカン（10 mg/kg、1 回）を尾静脈内投与した。投与の 8 日後に腫
瘍を摘出し、CD8 の免疫組織化学染色を実施した。各群 n = 3 で、写真はそれぞれの
個体由来の腫瘍の代表的な染色像を、スケールバーは 250 m を示す。グラフは、単
位腫瘍面積当たりの CD8 陽性 T 細胞数の平均値と標準誤差（n = 3）を示す。
E. CT26.WT-hHER2 細胞を BALB/c マウスに皮下移植し、腫瘍が生着した後、トラス
ツズマブデルクステカン（10 mg/kg）、CD4 陽性細胞除去抗体である抗 CD4 抗体
（CD4 depletion、200 g/head）および CD8 陽性細胞除去抗体である抗 CD8 抗体
（CD8 depletion、200 g/head）を黒矢印で示す日に尾静脈内投与し、その抗腫瘍効
果を検討した。グラフは、推定腫瘍体積の平均値と標準誤差（n = 10）を示す。なお、
試験の途中で動物倫理の観点から安楽殺した個体が存在したため、CD4 depletion 群
および CD8 depletion 群においてグラフが途絶えている。
F.
（E）における各個体の推定腫瘍体積の推移を示す。
34
35
Figure 4. トラスツズマブデルクステカンは樹状細胞を活性化させる
A.
マウス骨髄由来細胞を dimethyl sulfoxide（DMSO）または DXd 存在下で 24 時間培
養し、フローサイトメトリーを用いて CD45、CD11c、CD86 および MHC class II の
発現を検出した。ヒストグラムは、CD45 陽性 CD11c 陽性細胞上の CD86 および
MHC class II の発現量を示す。
B.
CT26.WT-hHER2 細胞を BALB/c マウスに皮下移植し、腫瘍が生着した後、トラス
ツズマブデルクステカン（T-DXd、10 mg/kg、1 回）を尾静脈内投与した。投与開始
から 8 日後に腫瘍を摘出し、フローサイトメトリーを用いて CD45、CD11c、CD86
および MHC class II の発現を検出した。グラフは、CD45 陽性細胞に占める樹状細
胞（DCs: CD45 陽性 CD11c 陽性 MHC class II 陽性細胞）の割合、樹状細胞に占め
る CD86 陽性細胞の割合そして樹状細胞上の CD86 の発現量（Mean Fluorescence
Intensity: MFI）の平均値および標準誤差を示す（n = 7）
。スチューデントの t 検定
にてトラスツズマブデルクステカン投与群と vehicle 投与群を比較した。
36
37
38
Figure 5.トラスツズマブデルクステカン投与により、抗腫瘍免疫記憶が構築される
A.
CT26.WT-hHER2 細胞を BALB/c マウスに皮下移植し、腫瘍が生着した後、トラス
ツズマブデルクステカン（T-DXd、10 mg/kg、週 1 回、計 2 回）を尾静脈内投与する
ことで得られた腫瘍が完全に縮退したマウス（CR マウス: CR mice by T-DXd）と
naïve マウスに CT26.WT-hHER2 細胞または CT26.WT-mock 細胞をそれぞれ皮下移
植し、腫瘍の体積推移を調べた。グラフは推定腫瘍体積の平均値と標準誤差（n = 9）
を示す。試験終了日の推定腫瘍体積を用いて、ウィルコキソン順位和検定にて以下の
群を比較した。
・Naïve mice challenged with CT26.WT-mock と CR mice by T-DXd challenged
with CT26.WT-mock
・Naïve mice challenged with CT26.WT-hHER2 と CR mice by T-DXd challenged
with CT26.WT-hHER2
B.
（A）における各個体の推定腫瘍体積の推移を示す。
C, D
（A）の試験終了後、各マウス由来の脾臓細胞を、CT26.WT-mock 細胞または
CT26.WT-hHER2 細胞とそれぞれ共培養し、IFN- の産生を ELISPOT アッセイに
より検出した。グラフは、IFN- 産生脾臓細胞数の平均値と標準誤差（n = 9） を示
す。ウィルコキソン順位和検定にて以下の群を比較した。
・Naïve mice challenged with CT26.WT-mock と CR mice by T-DXd challenged
with CT26.WT-mock
・Naïve mice challenged with CT26.WT-hHER2 と CR mice by T-DXd challenged
with CT26.WT-hHER2
39
40
Figure 6. トラスツズマブデルクステカンによりがん細胞上の免疫関連分子の発現が増加
する
A.
CT26.WT-hHER2 細胞を BALB/c マウスに皮下移植し、腫瘍が生着した後、トラス
ツズマブデルクステカン（T-DXd、10 mg/kg、1 回）を尾静脈内投与した。投与開始
から 8 日後に腫瘍を摘出し、フローサイトメトリーを用いてヒト HER2（hHER2）、
PD-L1 および MHC class I の発現を検出した。グラフは、hHER2 陽性細胞上の PDL1 の発現量（Mean Fluorescence Intensity: MFI）および MHC class I の発現量の
平均値および標準誤差を示す（n = 7）。スチューデントの t 検定にて、トラスツズマ
ブデルクステカン投与群と vehicle 投与群を比較した。
B.
CT26.WT-hHER2 細胞を dimethyl sulfoxide（DMSO）、DXd、DM1、DM4 または
MMAE 存在下で 24 時間培養し、MHC class I の発現を、フローサイトメトリーを用
いて検出した。グラフは各発現量（Adjusted MFI: 染色した細胞における MFI から
Isotype control で処理した細胞における MFI を引いた値）の平均値および標準誤差
を示す（triplicate）
。DMSO 処置をコントロールとして、ダネットの多重比較検定を
実施した（** P < 0.01、*** P < 0.001）
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Figure 7. トラスツズマブデルクステカンは抗 PD-1 抗体と併用することでより強い抗腫瘍
効果を示す
CT26.WT-hHER2 細胞を BALB/c マウスに皮下移植し、腫瘍が生着した後、トラスツズ
マブデルクステカン（T-DXd、10 mg/kg、赤矢印）
、抗 PD-1 抗体（anti-PD-1 Ab、5 mg/kg、
青矢印）を矢印で示す日に尾静脈内投与した。グラフは生存曲線および投与開始後 38 日目
の時点で腫瘍が完全に縮退したマウス（CR マウス）の数を示す。生存率はカプランマイヤ
ー法を用いて解析し、ログランク検定を用いて以下の群を比較した。
・Vehicle 投与群とトラスツズマブデルクステカン投与群: P = 0.0001、抗 PD-1 抗体投与
群: P = 0.0010
・トラスツズマブデルクステカンおよび抗-PD-1 抗体併用投与群とトラスツズマブデルク
ステカン投与群: P = 0.0006、抗 PD-1 抗体投与群: P < 0.0001
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Figure 8. トラスツズマブデルクステカンは抗 CTLA-4 抗体と併用することでより強い抗
腫瘍効果を示す
EMT6-hHER2 細胞を BALB/c マウスに皮下移植し、腫瘍が生着した後、トラスツズマブ
デルクステカン（T-DXd、10 mg/kg、赤矢印）
、抗 CTLA-4 抗体（anti-CTLA-4 Ab、5 mg/kg、
青矢印）を矢印で示す日に尾静脈内投与した。グラフは生存曲線および投与開始後 70 日目
の時点で腫瘍が完全に縮退したマウス（CR マウス）の数を示す。生存率はカプランマイヤ
ー法を用いて解析し、ログランク検定を用いて以下の群を比較した。
・Vehicle 投与群とトラスツズマブデルクステカン投与群: P = 0.0022、抗 CTLA-4 抗体
投与群: P = 0.0012
・トラスツズマブデルクステカンおよび抗 CTLA4 抗体併用投与群とトラスツズマブデ
ルクステカン投与群: P < 0.0001、抗 CTLA-4 抗体投与群: P < 0.0001
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Figure 9. トラスツズマブデルクステカンは抗 CTLA-4 抗体と併用することで腫瘍内 T 細
胞を増加させる
EMT6-hHER2 細胞を BALB/c マウスに皮下移植し、腫瘍が生着した後、トラスツズマブ
デルクステカン（T-DXd、10 mg/kg、1 回）、抗 CTLA-4 抗体（anti-CTLA-4 Ab、5 mg/kg、
週 2 回、計 2 回）を尾静脈内投与した。投与開始 8 日後に腫瘍を摘出し、フローサイトメ
トリーを用いて CD45、TCR、CD4 および CD8 の発現を検出した。グラフは、生細胞に
占める CD45 陽性細胞の割合、CD4 陽性 T 細胞の割合（CD4+ T cells: CD45+TCR+CD4+
cells）
、CD8 陽性 T 細胞の割合（CD8+ T cells: CD45+TCR+CD8+ cells）の平均値および標
準誤差（n = 6）を示す。ダネットの多重比較検定で以下の群を比較した（** P < 0.01、***
P < 0.001）。
・Vehicle 投与群とトラスツズマブデルクステカン投与群、抗 CTLA-4 抗体投与群
・トラスツズマブデルクステカンおよび抗 CTLA-4 抗体併用投与群とトラスツズマブデ
ルクステカン投与群、抗 CTLA-4 抗体投与群
また、ヨンクヒールタプストラ検定で以下の群を比較した。
・Vehicle 投与群、トラスツズマブデルクステカン投与群、トラスツズマブデルクステカ
ンおよび抗 CTLA-4 抗体併用投与群（## P < 0.01、
### P
< 0.001）
・Vehicle 投与群、抗 CTLA-4 抗体投与群、
トラスツズマブデルクステカンおよび抗 CTLA4 抗体併用投与群（$$ P < 0.01、$$$ P < 0.001）
44
45
46
Figure 10. トラスツズマブデルクステカンと抗 CTLA-4 抗体の併用により抗腫瘍記憶が構
築される
A.
Fig. 8 において、トラスツズマブデルクステカン（T-DXd、10 mg/kg、週 1 回、計 2
回）と抗 CTLA-4 抗体（anti-CTLA-4 Ab、5 mg/kg、週 2 回、計 4 回）を併用投与し
て腫瘍が完全に縮退したマウス（CR マウス、CR mice by T-DXd + anti-CTLA-4 Ab）
と naïve マウスに EMT6-hHER2 細胞または EMT6-mock 細胞をそれぞれ皮下移植
し、腫瘍の体積推移を調べた。グラフは推定腫瘍体積の平均値と標準誤差（n = 8）を
示す。試験終了時の推定腫瘍体積を用いて、ウィルコキソン順位和検定にて以下の群
を比較した。
・naïve mice challenged with EMT6-mock と CR mice by T-DXd + anti-CTLA-4
Ab challenged with EMT6-mock
・naïve mice challenged with EMT6-hHER2 と CR mice by T-DXd + anti-CTLA4 Ab challenged with EMT6-hHER2
B.
（A）における各個体の推定腫瘍体積の推移を示す。
C, D
（A）の試験終了後、各マウス由来の脾臓細胞を、EMT6-mock 細胞または EMT6-
hHER2 細胞とそれぞれ共培養し、IFN- の産生を ELISPOT アッセイにより検出し
た。グラフは、IFN- 産生脾臓細胞数の平均値と標準誤差（n = 8）を示す。ウィルコ
キソン順位和検定にて以下の群を比較した。
・naïve mice challenged with EMT6-mock と CR mice by T-DXd + anti-CTLA-4
Ab challenged with EMT6-mock
・naïve mice challenged with EMT6-hHER2 と CR mice by T-DXd + anti-CTLA4 Ab challenged with EMT6-hHER2
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Figure 11. トラスツズマブデルクステカンによる抗腫瘍免疫賦活化のモデル図
トラスツズマブデルクステカン（T-DXd）は、がん細胞上に発現している HER2 に結合
し、細胞内へと取り込まれ、がん細胞死を惹起するとともに、DXd を腫瘍内へと放出し、
がん細胞上の MHC class I の発現量の増加を引き起こす。続いて樹状細胞ががん抗原へ暴
露され、また直接 DXd によって活性化される。樹状細胞の活性化に伴い、T 細胞の活性化
が引き起こされ、活性化 T 細胞ががん細胞上の MHC class I 複合体を認識して、がん細胞
を排除する。また、T 細胞が活性化されることによって、がん細胞上の PD-L1 の発現が増
加する。
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