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Molecular pathogenesis of bone marrow disorders in dogs

谷, 章禎 東京大学 DOI:10.15083/0002006912

2023.03.24

概要

審 査 の 結 果 の 要 旨

氏 名

谷 章禎

骨髄疾患はさまざまな血液学的異常をきたす疾患であり、犬においても非再生性貧血をはじめ多彩な
病態が認められ、その発症機序から腫瘍性疾患、低形成性疾患、および異形成性疾患に分類される。こ
のうち非腫瘍性疾患には非再生性免疫介在性貧血、再生不良性貧血、赤芽球癆、骨髄異形成症候群など
が含まれ、骨髄疾患全体のおよそ 6 割を占めると報告されている。これまでに報告されている犬の非腫
瘍性骨髄疾患の病態解析に関する研究はおもに臨床病理学的および病理組織学的な観点から行われてお
り、その分子病態を解析した研究は限られていた。本研究は犬の非腫瘍性骨髄疾患の病態を臨床病理学
的解析および分子生物学的解析によって明らかにすることを目的として実施された。
第 1 章では、ミニチュアダックスフント(MD)が他犬種と比較して非腫瘍性骨髄疾患と診断される頻
度が有意に高いことを明らかにしている。次に、免疫抑制治療に対する反応性によって治療反応性 MD
と治療抵抗性 MD に分け、その臨床病理学的特徴を比較した。治療抵抗群においては、有意に血小板数
が増加していること、血球の異形成所見がより高頻度に認められること、さらに血球のクローン性が有
意に高頻度に認められることが明らかとなった。以上の結果から、MD には非腫瘍性骨髄疾患を好発す
る遺伝的素因があること、また治療抵抗群は治療反応群とは異なる臨床病理学的特徴を有することが示
された。
第 2 章では、第 1 章の結果を受け、末梢血由来 DNA を用いた全エキソーム解析(WES)によって、非
腫瘍性骨髄疾患に罹患した MD の血液細胞における遺伝子変異の網羅的な探索が行われた。4 頭の治療
抵抗性 MD と血液学的異常が認められない 3 頭のコントロール MD から得た末梢血液を WES に供した。
その結果、3,377 のヘテロ遺伝子変異が治療抵抗性 MD において認められた。このうち UMODL1 遺伝
子変異が治療反応性 MD および治療抵抗性 MD において認められ、コントロール MD には認められなか
った。一方、治療抵抗性 MD に特異的な遺伝子変異は同定されなかったため、治療反応性 MD と治療抵
抗性 MD の病態の違いを明らかにするためにはさらなる探索が必要と考えられた。
第 3 章では、第 2 章の結果を受け、とくに治療抵抗性 MD の病態にはゲノム塩基配列の変化を伴わな

いエピジェネティック機構が関与しているという仮説を立て、最も一般的なエピジェネティック異常の
一つとして DNA メチル化の変化をゲノム網羅的に探索している。3 頭の健常犬、2 頭の治療感受性 MD、
および 1 頭の治療抵抗性 MD の骨髄由来 DNA を用い、ゲノム網羅的な DNA メチル化解析が行われた。
その結果、健常犬と比較して治療感受性 MD および治療抵抗性 MD において 27 遺伝子のプロモーター
領域における DNA メチル化変動が認められた。また、メチル化変動遺伝子の mRNA 発現量を RT-qPCR
法によって定量し、治療抵抗性 MD においては高メチル化が認められた SFRP2 遺伝子の発現が有意に
低下していることを示している。
第 4 章では、第 3 章の結果を受け、治療抵抗性 MD に特徴的な遺伝子発現変動が存在するという仮説
のもと、健常犬 3 頭と治療抵抗性 MD3 頭より採取した骨髄由来 RNA を用い、RNA シーケンスが行わ
れた。その結果、健常犬と治療抵抗性 MD の間で発現量が異なる遺伝子(DEG)として 179 遺伝子が抽出
された。エンリッチメント解析により、これら DEG には Wnt シグナリング経路に関わる遺伝子群が有
意に多く含まれることが示された。また、RT-qPCR を用いて他症例を含めて比較した結果、治療抵抗性
MD 群において SFRP2 遺伝子と AXIN2 遺伝子の発現低下、および CCND2 遺伝子の発現上昇が認めら
れた。SFRP2 および AXIN2 は Wnt シグナリングの負の制御因子であり、CCND2 は Wnt シグナリン
グ経路の活性化により発現が上昇することが知られているため、本章の結果は治療抵抗性 MD の骨髄に
おいては Wnt シグナリングが活性化が存在することを示していた。
以上の研究において、申請者は犬の非腫瘍性骨髄疾患は MD において好発すること、また、その治療
反応性群と治療抵抗群の間で異なる臨床病理学的特徴が存在することを明らかにした。次に、申請者は
非腫瘍性骨髄疾患に罹患した MD に関する網羅的な分子生物学的解析を行い、UMODL1 遺伝子の変異
が MD における非腫瘍性骨髄疾患の発症に関与している可能性があること、また治療感受性 MD と治療
抵抗性 MD との間で Wnt シグナリング活性化状態が異なることを示した。これら研究成果は、獣医学領
域における骨髄疾患の客観的診断法の提唱および新規治療法の開発に有用であり、学術上応用上寄与す
るところが少なくない。よって審査委員一同は本論文が博士(獣医学)の学位論文として価値あるもの
と認めた。

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